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本制品是专用于探针法(TaqMan,Molecular Beacon等)实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×，包含GoldStar Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、Mg²⁺和ROX，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后cDNA靶序列检测，如基因表达分析，拷贝数分析，SNP基因型分析等，适用于不同类型探针法荧光定量。本品含有的GoldStar Taq DNA Polymerase是一种经化学修饰的、全新高效热启动酶，在常温下没有聚合酶活性，有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活须在95℃下孵育10分钟。独特的PCR缓冲体系与热启动酶的组合，显著提高了PCR的扩增效率，荧光信号更强，灵敏度更高，可以检测单拷贝的模板。使用本制品可以得到更广的线性范围，对目的基因定量更准确。本品中ROX含量较低，适用于ABI7500、Stratagene Mx3000、3005、4000等仪器。

• 使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
  
• 本制品中含有ROX染料，保存本制品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
  
• 避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本制品长期保存可置于-20℃。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。

• PCR反应体系
  

  成分	用量	终浓度
  2×BalbExcel GoldStar TaqMan PCR Mix(含ROX)	25μL	1×
  Forward Primer,10μM	1μL	0.2μM
  Reverse Primer,10μM	1μL	0.2μM
  Probe,10μM	1μL	0.2μM
  Template DNA	2μL	-
  RNase-Free ddH2O	至50μL	-

  • 通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以终浓度0.1～1.0μM作为设定范围的参考。
    
  • 使用的探针浓度，与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
    
  • 通常DNA模板的量以10～100ng基因组DNA或1～10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
• PCR反应程序
  
  • 若PCR产物的长度小于150bp并且引物的最佳退火温度在58～65℃范围内，按两步法反应程序进行qPCR。
    

    步骤	温度	时间	循环数
    预变性	95℃	3min	1
    变性	95℃	20s	40
    退火/延伸/数据采集	60℃	30s
    熔解曲线分析	按照仪器要求进行设置

  • 若PCR产物的长度大于150bp或者引物的最佳退火温度不在58～65℃范围内，按三步法反应程序进行qPCR。
    

    步骤	温度	时间	循环数
    预变性	95℃	3min	1
    变性	95℃	15s	40
    退火	最佳退火温度	20s
    延伸/数据采集	72℃	25s
    熔解曲线分析	按照仪器要求进行设置

    • 本品中ROX含量较低，适用于ABI7500、Stratagene Mx3000、3005、4000等仪器。